Development of a hyperimmune equine serum therapy for COVID-19 in Argentina

The disease named COVID-19, caused by the SARS-CoV-2 coronavirus, is currently generating a global pandemic. Vaccine development is no doubt the best long-term immunological approach, but in the current epidemiologic and health emergency there is a need for rapid and effective solutions. Convalescent plasma is the only antibody-based therapy available for COVID-19 patients to date. Equine polyclonal antibodies (EpAbs) put forward a sound alternative. The new generation of processed and purified EpAbs containing highly purified F(ab’)2 fragments demonstrated to be safe and well tolerated. EpAbs are easy to manufacture allowing a fast development and scaling up for a treatment. Based on these ideas, we present a new therapeutic product obtained after immunization of horses with the receptor-binding domain of the viral Spike glycoprotein. Our product shows around 50 times more potency in in vitro seroneutralization assays than the average of convalescent plasma. This result may allow us to test the safety and efficacy of this product in a phase 2/3 clinical trial to be conducted in July 2020 in the metropolitan area of Buenos Aires, Argentina.

La enfermedad denominada COVID-19 es causada por el coronavirus SARS-CoV-2 y es actualmente considerada una pandemia a nivel global. El desarrollo de vacunas es sin duda la mejor estrategia a largo plazo, pero debido a la emergencia sanitaria, existe una necesidad urgente de encontrar soluciones rápidas y efectivas para el tratamiento de la enfermedad. Hasta la fecha, el uso de plasma de convalecientes es la única inmunoterapia disponible para pacientes hospitalizados con COVID-19. El uso de anticuerpos policlonales equinos (EpAbs) es otra alternativa terapéutica interesante. La nueva generación de EpAbs incluyen el procesamiento y purificación de los mismos y la obtención de fragmentos F(ab’)2 con alta pureza y un excelente perfil de seguridad en humanos. Los EpAbs son fáciles de producir, lo cual permite el desarrollo rápido y la elaboración a gran escala de un producto terapéutico. En este trabajo mostramos el desarrollo de un suero terapéutico obtenido luego de la inmunización de caballos utilizando el receptor-binding domain de la glicoproteína Spike del virus. Nuestro producto mostró ser alrededor de 50 veces más potente en ensayos de seroneutralización in vitro que el promedio de los plasmas de convalecientes. Estos resultados nos permitirían testear la seguridad y eficacia de nuestro producto en ensayos clínicos de fase 2/3 a realizarse a partir de julio de 2020 en la zona metropolitana de Buenos Aires, Argentina.

Human papillomavirus risk factors for infection and genotype distribution in aboriginal women from Northern Argentina / Virus papiloma humano (hpv) en mujeres de la etnia Pilagá del nordeste argentino: Factores de riesgo de infección y distribución de tipos virales

The mortality rate for cervical cancer (CC) in Northern Argentina is three times higher than the average for the country (7.8 deaths/100 000 women). We determined the prevalence and genotype distribution of human papillomavirus (HPV) in 227 sexually active women of the native Pilagá community in Formosa, Argentina. We also conducted an HPV-16 variant analysis and studied several community factors that might play a role in viral entry and infection. Endo- and exocervical samples were tested for HPV DNA with MY09/11-PCR or with GP5+/6+-PCR. HPV was detected in 46.7% of the samples and 21 different types were found; the most frequent being HPV-16 (19.4%), -6 and -18 (5.3%), -58 (3.5%) and -31 and -33 (3.1%). In relation to HPV-16 variants, 68.2% were European and 31.8% Asian-American. Among the cofactors analyzed only disposal of human excreta to the open air (P=0.01) was significantly associated with HPV infection. Our prevalence estimates clearly show that Pilagá women are highly exposed to or infected with high risk HPV types and therefore are at a high risk of developing precancerous lesions and eventually CC at the population level.

La tasa de mortalidad por cáncer cervical (CC) en la región norte de la Argentina es tres veces más alta que la media del país (7.8 muertes/100 000 mujeres). En el presente trabajo se determinó la prevalencia de infección por virus papiloma humano (VPH) y la distribución y frecuencia de los genotipos en 227 mujeres sexualmente activas de la etnia aborigen Pilagá (Formosa, Argentina). También se realizó un análisis de las variantes intratípicas de VPH-16 presentes en la comunidad y se analizaron diversos factores socioculturales que podrían tener algún rol destacado en la transmisión de la infección viral. Se estudiaron muestras de células endo-exocervicales mediante PCR basadas en los cebadores MY09/11 y GP5+/6+ con posterior restricción enzimática y/o hibridación dot-blot. La infección por VPH fue detectada en el 46.7% de las mujeres analizadas. Fueron identificados 21 genotipos, de los cuales los más frecuentes fueron HPV-16 (19.4%), -6 y -18 (5.3%), -58 (3.5%) y -31 y -33 (3.1%). Respecto al HPV-16, se encontraron 68.2% de variantes europeas y 31.8% de asiático-americanas. Entre los cofactores analizados, solo la disposición de excretas al aire libre estuvo significativamente asociada con la infección por VPH (P = 0.01). Los datos obtenidos reflejan que la comunidad Pilagá está altamente expuesta a las infecciones por genotipos de alto riesgo de VPH, lo cual puede estar asociado a una alta incidencia de lesiones cervicales preneoplásicas y neoplásicas.

Human papillomavirus in oral lesions / Virus papiloma humano en lesiones orales

Growing evidence suggests a role for human papillomavirus (HPV) in oral cancer; however its involvement is still controversial. This study evaluates the frequency of HPV DNA in a variety of oral lesions in patients from Argentina. A total of 77 oral tissue samples from 66 patients were selected (cases); the clinical-histopathological diagnoses corresponded to: 11 HPV- associated benign lesions, 8 non-HPV associated benign lesions, 33 premalignant lesions and 25 cancers. Sixty exfoliated cell samples from normal oral mucosa were used as controls. HPV detection and typing were performed by polymerase chain reaction (PCR) using primers MY09, 11, combined with RFLP or alternatively PCR using primers GP5+, 6+ combined with dot blot hybridization. HPV was detected in 91.0% of HPV- associated benign lesions, 14.3% of non-HPV associated benign lesions, 51.5% of preneoplasias and 60.0% of cancers. No control sample tested HPV positive. In benign HPV- associated lesions, 30.0% of HPV positive samples harbored high-risk types, while in preneoplastic lesions the value rose to 59.9%. In cancer lesions, HPV detection in verrucous carcinoma was 88.9% and in squamous cell carcinoma 43.8%, with high-risk type rates of 75.5% and 85.6%, respectively. The high HPV frequency detected in preneoplastic and neoplastic lesions supports an HPV etiological role in at least a subset of oral cancers.

Crecientes evidencias sugieren que el virus Papiloma humano (HPV) tiene un rol en el cáncer oral; sin embargo su participación es todavía controvertida. Este estudio evalúa la frecuencia de ADN de HPV en una variedad de lesiones orales de pacientes de Argentina. Se seleccionaron 77 muestras de tejido oral de 66 pacientes (casos); el diagnóstico histo-patológico correspondió a: 11 lesiones benignas asociadas a HPV, 8 lesiones benignas no asociadas a HPV, 33 lesiones premalignas y 25 cánceres. Como controles se usaron 60 muestras de células exfoliadas de mucosa oral normal. La detección y tipificación de HPV se realizó por PCR empleando los primers MY09,11, seguida de RFLP, o PCR usando los primers GP5+, 6+ seguida de hibridación en dot blot. HPV fue detectado en 91% de las lesiones benignas asociadas a HPV, 14.3% de las lesiones benignas no asociadas, 51.5% de preneoplasias y 60% de cánceres. Ninguna muestra control resultó HPV positiva. En las lesiones benignas, 30% de las muestras HPV positivas correspondieron a tipos de alto riesgo, mientras que en las lesiones preneoplásicas la positividad ascendió a 59.9%. En cánceres, la detección de HPV en carcinomas verrugosos fue 88.9% y en carcinomas escamosos 43.8%, con 75.5% y 85.6% de tipos virales de alto riesgo, respectivamente. La alta frecuencia de HPV detectada en lesiones preneoplásicas y cánceres apoya un rol etiológico del HPV en, al menos, un subgrupo de cánceres orales.